• 馬鈴薯莖尖脫毒

    發布時間:2018-03-21 瀏覽次數:2998次 字號:【

    馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產重要源頭,也是質量關的重中之重;因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。

       一、脫毒材料選取
           1、馬鈴薯脫毒材料的選取
           田間選擇在現蕾到開花期選擇生長勢強,具備原品種典型性狀的健康植株做好標記。生育后期到收獲期,在已做標記的植株中進行薯塊復選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯,拿回實驗室催芽作為脫毒材料。
           2、催芽處理
           塊莖可通過自然方法出芽或通過人工方法打破休眠。自然出芽的情況下,塊莖長出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情況下,可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗條件下催芽。
           二、莖尖培養
         (1)莖尖培養基制備
          1、莖尖培養基配方
    ①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
    ②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
           2、MS培養基
           3、將制備好的培養基快速分裝于容器內,用封口膜封口,121℃高壓滅菌20min,冷卻后在無菌貯存室放置3~5d,無污染的培養基放到超凈工作臺備用。
         (2)莖尖剝離
           1、材料消毒
           取經催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側芽,用自來水沖洗30min后,移入接種室進行嚴格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用無菌水沖洗4~5次。
           2、莖尖剝離與接種
           接種在超凈工作臺上操作。剝去外葉,借助40倍雙目解剖鏡,剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長點,用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切,帶1~2個葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養基的容器中,進行離體培養。用酒精燈灼燒容器口并封口,在容器上注明編號、品種名稱,接種日期。待看到明顯伸長得小莖、葉原基形成可見的小葉時,轉移到盛有MS培養基的容器內培養,培養成4~5個葉片的試管苗。
           3、培養條件
           試管苗在溫度20~25℃、相對濕度70%、光照強度2000~3000Lx條件下培養,光照時數16h/d。
           4、病毒檢測
    ① 將試管苗按瓶上的編號,在超凈工作臺內將植株的上部1/3~1/2莖段轉入新的培養基瓶中,編號不變。
    ② 同時將植株下部1/3~1/2莖段稱取0.2g裝入病毒檢測的樣品袋中。取樣時樣品不能粘有培養基。
    ③ 檢測方法用ELISA(雙抗體夾心法),篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
           三、試種觀察
           經檢測不帶病毒的試管苗進行試種觀察。將每個試管苗取出部分移栽到防蟲網棚,結出的小薯種植到田間試種觀察,檢驗其是否發生變異,符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產重要源頭,也是質量關的重中之重;因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。
           一、脫毒材料選取
           1、馬鈴薯脫毒材料的選取
           田間選擇在現蕾到開花期選擇生長勢強,具備原品種典型性狀的健康植株做好標記。生育后期到收獲期,在已做標記的植株中進行薯塊復選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯,拿回實驗室催芽作為脫毒材料。
           2、催芽處理
           塊莖可通過自然方法出芽或通過人工方法打破休眠。自然出芽的情況下,塊莖長出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情況下,可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗條件下催芽。
           二、莖尖培養
         (1)莖尖培養基制備
           1、莖尖培養基配方
    ①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
    ②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
           2、MS培養基
           3、將制備好的培養基快速分裝于容器內,用封口膜封口,121℃高壓滅菌20min,冷卻后在無菌貯存室放置3~5d,無污染的培養基放到超凈工作臺備用。
           (2)莖尖剝離
           1、材料消毒
           取經催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側芽,用自來水沖洗30min后,移入接種室進行嚴格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用無菌水沖洗4~5次。
           2、莖尖剝離與接種
           接種在超凈工作臺上操作。剝去外葉,借助40倍雙目解剖鏡,剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長點,用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切,帶1~2個葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養基的容器中,進行離體培養。用酒精燈灼燒容器口并封口,在容器上注明編號、品種名稱,接種日期。待看到明顯伸長得小莖、葉原基形成可見的小葉時,轉移到盛有MS培養基的容器內培養,培養成4~5個葉片的試管苗。
           3、培養條件
           試管苗在溫度20~25℃、相對濕度70%、光照強度2000~3000Lx條件下培養,光照時數16h/d。
           4、病毒檢測
    ① 將試管苗按瓶上的編號,在超凈工作臺內將植株的上部1/3~1/2莖段轉入新的培養基瓶中,編號不變。
    ② 同時將植株下部1/3~1/2莖段稱取0.2g裝入病毒檢測的樣品袋中。取樣時樣品不能粘有培養基。
    ③ 檢測方法用ELISA(雙抗體夾心法),篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
           三、試種觀察
           經檢測不帶病毒的試管苗進行試種觀察。將每個試管苗取出部分移栽到防蟲網棚,結出的小薯種植到田間試種觀察,檢驗其是否發生變異,符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。馬鈴薯莖尖脫毒是馬鈴薯生產重要源頭,也是質量關的重中之重;因此馬鈴薯莖尖脫毒也是把控的重要部分。
           一、脫毒材料選取
           1、馬鈴薯脫毒材料的選取
           田間選擇在現蕾到開花期選擇生長勢強,具備原品種典型性狀的健康植株做好標記。生育后期到收獲期,在已做標記的植株中進行薯塊復選。選擇性狀符合原品種特征的幼齡薯,拿回實驗室催芽作為脫毒材料。
           2、催芽處理
           塊莖可通過自然方法出芽或通過人工方法打破休眠。自然出芽的情況下,塊莖長出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情況下,可采用0.1%多菌靈溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗條件下催芽。
           二、莖尖培養
          (1)莖尖培養基制備
           1、莖尖培養基配方
    ①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
    ②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
           2、MS培養基
           3、將制備好的培養基快速分裝于容器內,用封口膜封口,121℃高壓滅菌20min,冷卻后在無菌貯存室放置3~5d,無污染的培養基放到超凈工作臺備用。
          (2)莖尖剝離
           1、材料消毒
           取經催芽處理或自然出芽的塊莖的頂芽、2~3cm的側芽,用自來水沖洗30min后,移入接種室進行嚴格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用無菌水沖洗4~5次。
           2、莖尖剝離與接種
           接種在超凈工作臺上操作。剝去外葉,借助40倍雙目解剖鏡,剝離莖尖直至露出半圓形光滑生長點,用解剖針或刀從0.1~0.3mm處切,帶1~2個葉原基。迅速接種于盛有莖尖培養基的容器中,進行離體培養。用酒精燈灼燒容器口并封口,在容器上注明編號、品種名稱,接種日期。待看到明顯伸長得小莖、葉原基形成可見的小葉時,轉移到盛有MS培養基的容器內培養,培養成4~5個葉片的試管苗。
           3、培養條件
           試管苗在溫度20~25℃、相對濕度70%、光照強度2000~3000Lx條件下培養,光照時數16h/d。
           4、病毒檢測
    ① 將試管苗按瓶上的編號,在超凈工作臺內將植株的上部1/3~1/2莖段轉入新的培養基瓶中,編號不變。
    ② 同時將植株下部1/3~1/2莖段稱取0.2g裝入病毒檢測的樣品袋中。取樣時樣品不能粘有培養基。
    ③ 檢測方法用ELISA(雙抗體夾心法),篩選出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脫毒苗。
           三、試種觀察
           經檢測不帶病毒的試管苗進行試種觀察。將每個試管苗取出部分移栽到防蟲網棚,結出的小薯種植到田間試種觀察,檢驗其是否發生變異,符合原品種的典型性狀的脫毒苗即為核心苗。

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